உயிரியல் & மருத்துவத்தில் மேம்பட்ட நுட்பங்கள்
திறந்த அணுகல்
ஐ.எஸ்.எஸ்.என்: 2379-1764
ஐ.எஸ்.எஸ்.என்: 2379-1764
கோசோ ஹயாஷி மற்றும் ஹிரோயுகி கோபயாஷி
β1-அட்ரினெர்ஜிக் ஏற்பி (Adrb1), ஜி-புரோட்டீன் இணைந்த ஏற்பி (GPCR) சூப்பர் குடும்பத்தின் உறுப்பினரானது, இதய செயல்பாட்டின் முக்கியமான சீராக்கி ஆகும். அனைத்து GPCR களும் பல தளங்களில் பாஸ்போரிலேட்டட் செய்யப்படுகின்றன, மேலும் பாஸ்போரிலேஷன் குறிப்பிட்ட வடிவமானது திசு-குறிப்பிட்ட முறையில் ஏற்பி செயல்பாடு மற்றும் கீழ்நிலை உடலியல் செயல்முறைகளை ஒழுங்குபடுத்த "பார்கோடு" ஆக செயல்படுகிறது. இருப்பினும், குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகள் இல்லாததால் விவோவில் Adrb1 பாஸ்போரிலேஷன் தளங்களின் இருப்பிடம் மற்றும் செயல்பாடு பற்றி அதிகம் அறியப்படவில்லை. Adrb1 இன் பாஸ்போரிலேஷன் நிலைகள் மற்றும் இன் விவோ மவுஸ் இதயத்தில் தொடர்புடைய செயல்பாடுகளை அடையாளம் காண்பதற்கான முதல் படியாக, பின்வரும் சோதனை மூலோபாயத்தை நாங்கள் உருவாக்கினோம்: 1) மேம்பட்ட பாஸ்போபுரோட்டியோமிக்ஸ் நுட்பங்களைப் பயன்படுத்தி தனிமைப்படுத்தப்பட்ட பெர்ஃப்யூஸ்டு மவுஸ் இதயத்தில் அகோனிஸ்ட் சார்ந்த Adrb1 பாஸ்போரிலேஷன் தளங்களை அடையாளம் காணுதல்; 2) Adrb1- ஓவர் எக்ஸ்பிரஸ்ஸிங் HEK 293T கலங்களிலிருந்து பெறப்பட்ட உயர்தர மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி (MS) தரவு மூலம் இந்த பாஸ்போரிலேஷன் தளங்களின் உறுதியான ஒதுக்கீடு; 3) நாக்-இன் (KI) எலிகளை வெளிப்படுத்தும் Adrb1 ஐ வெளிப்படுத்தும் எலிகள், N-டெர்மினஸில் FLAG-டேக் உடன் இணைக்கப்பட்டு, உயிருள்ள உயிரினங்களுக்குள் உள்ள பாஸ்போரிலேஷன் நிலையை வெளிப்படுத்த இம்யூனோஃபினிட்டி சுத்திகரிப்புக்காக; 4) KI மவுஸ் இதயத்தில் Adrb1 இன் குறிப்பிட்ட தளங்களில் பாஸ்போரிலேட்டட் பெப்டைட்டின் MS அளவீடுகள் மூலம் பாஸ்போரிலேட்டட் பெப்டைட் அயனி தீவிர விகிதங்கள் மூலம் பாஸ்போரிலேஷன் அளவை தெளிவுபடுத்துதல். இந்த மூலோபாயத்தைப் பயன்படுத்தி, Adrb1 இன் சி-டெர்மினஸில் Ser462 ஐ பெர்ஃப்யூஸ்டு மவுஸ் இதயத்தில் ஒரு அகோனிஸ்ட் சார்ந்த பாஸ்போரிலேஷன் தளமாக அடையாளம் கண்டோம். KI மைஸில் Ser274 (0.25), Ser417 (0.55) மற்றும் Ser462 (0.0023) ஆகிய அடிப்படை பாஸ்போரிலேஷன் விகிதங்களையும் நாங்கள் வெளிப்படுத்தினோம். இந்த கண்டுபிடிப்புகள் தளம் சார்ந்த பாஸ்போரிலேஷன் மூலம் மத்தியஸ்தம் செய்யப்பட்ட Adrb1 செயல்பாட்டின் ஒழுங்குமுறை வழிமுறைகள் பற்றிய புதிய நுண்ணறிவுகளை வழங்குகின்றன.