மருத்துவ மற்றும் பரிசோதனை கண் மருத்துவ இதழ்
திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

விழித்திரையில் ஒரு நாவல் மரபணுவான 2 (Pnpla2) கொண்ட பாஸ்போலிபேஸ் டொமைனின் மாற்றாகப் பிரிக்கப்பட்ட மாறுபாடுகளைத் தேடுகிறது

ஜாக்குலின் டேலியா டெஸ்ஜார்டின், எஸ் பாட்ரிசியா பெசெரா மற்றும் ப்ரீத்தி சுப்ரமணியன்

நோக்கம்: Ensembl மற்றும் பிற வெளிப்படுத்தப்பட்ட வரிசைக் குறிச்சொல் (EST) தரவுத்தளங்கள் Pnpla2 க்கான சுட்டி மற்றும் எலி ஆகியவற்றில் உள்ள மாற்று பிளவு மாறுபாடுகளை வெளிப்படுத்துகின்றன , இது மரபணு குறியீட்டு நிறமி எபிட்டிலியம்-பெறப்பட்ட காரணி-ஏற்பி (PEDF-R). இந்த ஆய்வின் நோக்கம் சுட்டியில் உள்ள Pnpla2 பிளவு மாறுபாடுகளுக்கான சோதனை ஆதாரங்களைப் பெறுவதாகும்.

பொருட்கள் மற்றும் முறைகள்: ஒளிச்சேர்க்கைகள் (661W செல்கள்) மற்றும் சுட்டி கண், இதயம், கொழுப்பு, சிறுநீரகம் மற்றும் கல்லீரல் திசுக்களில் இருந்து பெறப்பட்ட சுட்டி செல் வரிசையின் கலாச்சாரங்கள் பயன்படுத்தப்பட்டன. Messenger RNA (mRNA) செல்கள் மற்றும் திசுக்களில் இருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்டது, மேலும் நிரப்பு DNA (cDNA) ஒருங்கிணைக்கப்பட்டது. பாலிமரேஸ் செயின் ரியாக்ஷன் (பிசிஆர்) ப்ரைமர் ஜோடிகள் புட்டேட்டிவ் ஸ்ப்லைஸ் தளங்களுக்கு பக்கவாட்டில் வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளன. முழு-நீள Pnpla2 டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டின் பெருக்கத்தைக் குறைக்கவும் மற்றும் குறைந்த ஏராளமான பிளவு வகைகளின் பெருக்கத்தை மேம்படுத்தவும் எக்ஸான் விலக்கு நிகழ்நேர PCR பயன்படுத்தப்பட்டது . PCR தயாரிப்புகள் அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ் மூலம் தீர்க்கப்பட்டு UV டிரான்சில்லுமினேட்டர் மூலம் கண்டறியப்பட்டது. மனித முழு நீள PNPLA2 cDNA அல்லது எக்ஸான் 5b (E5b) இல்லாத PNPLA2 cDNA ஆகியவற்றைக் கொண்ட மறுசீரமைப்பு பிளாஸ்மிட்கள் நுட்பங்களைச் சரிபார்ப்பதற்கான கட்டுப்பாடுகளாகும். 661W கலங்களிலிருந்து மொத்த செல் லைசேட்டுகள் தயாரிக்கப்பட்டன. PEDF-R புரதக் கண்டறிதல் வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்களைப் பயன்படுத்தி செய்யப்பட்டது.

முடிவுகள்: 661W செல்கள் அல்லது பல்வேறு மவுஸ் திசுக்களில் இருந்து பெறப்பட்ட Pnpla2 டிரான்ஸ்கிரிப்டுகளுக்கான PCR தயாரிப்புகள் , பல ப்ரைமர் ஜோடிகளுடன் கூடிய பெருக்கத்தைத் தொடர்ந்து ஒரே பேண்டாகத் தீர்க்கப்பட்டது. பல்வேறு மோலார் விகிதங்களில் இரண்டு PNPLA2 cDNA களின் ஒரே நேரத்தில் பெருக்கம் குறைந்த ஏராளமான டிரான்ஸ்கிரிப்ட்களைக் கண்டறிவதைத் தடுத்தது. இருப்பினும், முழு நீள Pnpla2 டிரான்ஸ்கிரிப்ட்டுக்கான cDNA எக்ஸான் விலக்கு முறையைப் பயன்படுத்தி கணிசமாக விலக்கப்பட்டாலும், Pnpla2 ஸ்ப்லைஸ் மாறுபாடுகளுடன் தொடர்புடைய பட்டைகள் எதுவும் கண்டறியப்படவில்லை. ஆயினும்கூட, இரண்டு வெவ்வேறு ஆன்டிபாடிகள் கொண்ட மொத்த 661W செல் லைசேட்டுகளின் வெஸ்டர்ன் பிளட்கள் PEDF-R புரதத்திற்கான ஐசோஃபார்ம்களை வெளிப்படுத்தின.

முடிவுரைகள்: ஒரு ஒற்றை, முழு நீள Pnpla2 டிரான்ஸ்கிரிப்ட் இருப்பதற்கான ஆதாரங்களை தரவு வழங்குகிறது , இது பிந்தைய மொழிபெயர்ப்பு செயலாக்கத்திற்கு உட்பட்ட ஒரு புரத தயாரிப்புக்கு வழிவகுக்கும்.