உயிரியல் & மருத்துவத்தில் மேம்பட்ட நுட்பங்கள்
திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

சீன வெள்ளெலி நுரையீரல் உயிரணு விகாரத்தில் குளோன் செய்யப்பட்ட மனித மரபணுவைப் பயன்படுத்தி மைட்டோகாண்ட்ரியல் மரபணு வெளிப்பாட்டின் மறுசீரமைப்பு

ஜாக்கி ஏ ஷெரிப் மற்றும் கரோலின் டபிள்யூ புரூம்

பின்னணி: Gal-32 என்பது ஒரு சீன வெள்ளெலி நுரையீரல் உயிரணு அணுக்கரு விகாரி ஆகும், இது மைட்டோகாண்ட்ரியல் புரதத் தொகுப்பின் குறைபாடு காரணமாக கேலக்டோஸில் வளர முடியாது. Gal-32 மரபணுவின் தயாரிப்பு அறியப்படாததால், Gal-32 பிறழ்வைச் சரிசெய்யும் மனித மரபணுவை குளோன் செய்ய பினோடைபிக் நிரப்புதலைப் பயன்படுத்துவது கட்டாயமாக இருந்தது.

முடிவுகள்: பின்னடைவு Gal-32 செல்கள் pSV2-நியோ பிளாஸ்மிட் டிஎன்ஏ மற்றும் மனித ஜீனோமிக் லைப்ரரியிலிருந்து மறுசீரமைப்பு டிஎன்ஏ ஆகியவற்றுடன் இணைந்து மாற்றப்பட்டன, அவை ஆதிக்கம் செலுத்தும் மனித Gal+ மரபணு மற்றும் pSV13 வெக்டரில் இருக்கும் குளோராம்பெனிகால்-எதிர்ப்பு (camr) மரபணுவைக் கொண்டுள்ளன. கேலக்டோஸ் மற்றும் நியோமைசின் அனலாக் ஜி418 ஆகியவற்றின் வளர்ச்சியால் முதன்மை உருமாற்றங்கள் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டன. மனித Gal+ மரபணுவை மீட்பதற்காக, முதன்மை மாற்றும் DNA மற்றும் pCV108 காஸ்மிட் வெக்டரைக் கொண்டு ஒரு மரபணு நூலகம் கட்டப்பட்டது. அருகிலுள்ள மனித வரிசைகளுடன் குளோன்களை அடையாளம் காண கேம்ர் மரபணு பயன்படுத்தப்பட்டது. இரண்டு கேமரில் இருந்து டிஎன்ஏ, அலு-ஹைப்ரிடைசிங் குளோன்கள் பின்னடைவு கேல்-32 செல்களை கேல்+ பினோடைப்பிற்கு மாற்றவும் மற்றும் மைட்டோகாண்ட்ரியல் புரதத் தொகுப்பை மீட்டெடுக்கவும் முடிந்தது.

முடிவு: இந்தத் தரவுகள் இரண்டு pCV108-மாற்றும் மறுசீரமைப்பு குளோன்களின் தனிமைப்படுத்தலை நிரூபிக்கின்றன, இது ஒரு மனித மரபணுவைக் கொண்டுள்ளது, இது சீன வெள்ளெலி Gal-32 பிறழ்வை நிறைவு செய்கிறது மற்றும் கேலக்டோஸ் வளர்சிதை மாற்றத்தை மீட்டெடுக்கிறது.