என்சைம் பொறியியல்
திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

இந்திய மேஜர் கார்ப், கேட்லா கட்லா (கேட்லா) இலிருந்து லிபேஸின் இரண்டாம் நிலை கட்டமைப்பின் தனிமைப்படுத்தல், சுத்திகரிப்பு மற்றும் சிறப்பியல்பு மற்றும் இயக்கவியல் ஆய்வு

காமேஷ்வர் சர்மா ஒய்விஆர், நீலிமா பூரா மற்றும் பிரசிதி தியாகி

லிபேஸ்கள் எங்கும் நிறைந்த என்சைம்கள் ஆகும், இது கொழுப்பு அமிலங்கள் மற்றும் கிளிசரால் நீர்ப்பகுப்புகளை நீர் லிப்பிட் இடைமுகத்தில் வினையூக்கி, நீர் அல்லாத ஊடகங்களில் எதிர்வினையை மாற்றியமைக்கிறது. லிபேஸ்கள் உயிர்வேதியியல், கரிம தொகுப்பு, சோப்பு உருவாக்கம் மற்றும் ஊட்டச்சத்து ஆகியவற்றில் அவற்றின் நாவல் மற்றும் பன்மடங்கு பயன்பாடுகள் காரணமாக உயிர்வேதியாளர்களிடையே முக்கிய இடத்தைப் பிடித்துள்ளன. லிபேஸ் உணவுக் கால்வாய் மற்றும் கேட்லா கட்லாவின் (கேட்லா) செரிமான குடலில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்டு தனிமைப்படுத்தப்பட்டது. திசு 1:3 என்ற விகிதத்தில் தொடக்க இடையகத்துடன் (0.01 M TrisHCl, pH 7.2) ஒரே மாதிரியாக மாற்றப்பட்டது. இவ்வாறு பெறப்பட்ட கச்சா சாறு அம்மோனியம் சல்பேட் (20-80%) பயன்படுத்தி துரிதப்படுத்தப்பட்டது. டயாலிசிஸ் மூலம் அதிகப்படியான உப்பு அகற்றப்பட்டது மற்றும் அதன் விளைவாக டயாலிசேட் (டெசல்டட் என்சைம்) 0.5 மிலி/நிமிட ஓட்ட விகிதத்தில் அயன் எக்ஸ்சேஞ்ச் குரோமடோகிராஃபிக்கு DEAE-செல்லுலோஸ் பத்திக்கு உட்படுத்தப்பட்டது. தொடக்க இடையகத்தில் NaCl (100-800 mM) படி சாய்வு மூலம் நீக்குதல் மேற்கொள்ளப்பட்டது. செயலில் உள்ள பின்னங்கள் சுத்திகரிக்கப்பட்ட பின்னம் (PF) எனத் தொகுக்கப்பட்டு, pH இன் இயற்பியல் தன்மை, வெப்பநிலை மற்றும் நொதி செயல்பாட்டில் கால்சியத்தின் விளைவு, கட்டமைப்பு தன்மை, மூலக்கூறு தன்மை மற்றும் இயக்கவியல் ஆய்வுகளுக்குப் பயன்படுத்தப்பட்டன. சுத்திகரிக்கப்பட்ட பின்னம் (PF) 1438.72 U/mg இன் இறுதி குறிப்பிட்ட செயல்பாட்டைக் காட்டியது. உகந்த pH 7.8 ஆகவும், உகந்த வெப்பநிலை 20ËšC ஆகவும் காணப்பட்டது. உருகும் வெப்பநிலை (Tm) மதிப்பு 42ËšC மற்றும் சுத்திகரிக்கப்பட்ட லிபேஸின் செயல்படுத்தும் ஆற்றல் 34.82 KJ/mol/K ஆகும். லிபேஸின் வெப்ப நிலைத்தன்மை 20ËšC இல் இருப்பது கண்டறியப்பட்டது. லிபேஸ் செயல்பாடு 10 mM மற்றும் 20 mM CaCl2 உடன் 3 மணிநேரம் வரை அடைகாக்கப்பட்டது. இது கால்சியம் நொதியின் சிதைவிலிருந்து பண்புகளை மேம்படுத்துகிறது என்பதைக் காட்டுகிறது. மைக்கேலிஸ்-மென்டென் மாறிலி (கிமீ) இந்திய பெரிய கெண்டையில் இருந்து லிபேஸ், கேட்லா pNPP இன் நீராற்பகுப்பு 6.695 mM ஆகும். லிபேஸின் (கேட்லா) விற்றுமுதல் எண் (kcat) 0.0022 s-1. லிபேஸின் வினையூக்க திறன் (kcat/Km) 0.0003412 s-1 mM-1 ஆகும். சுத்திகரிக்கப்பட்ட லிபேஸின் (PF) SDS-PAGE 70 kDa மூலக்கூறு நிறை கொண்ட ஒரே மாதிரியான ஒற்றை இசைக்குழுவை வெளிப்படுத்தியது. சுத்திகரிக்கப்பட்ட லிபேஸின் α ஹெலிகள் மற்றும் β இழைகளின் இரண்டாம் நிலை அமைப்பு முறையே 48.51% மற்றும் 9.74% முடிவுகளை வட்ட டைக்ரோயிசத்தைப் பயன்படுத்துகிறது.