மருத்துவ மற்றும் பரிசோதனை கண் மருத்துவ இதழ்
திறந்த அணுகல்
ஐ.எஸ்.எஸ்.என்: 2155-9570
ஐ.எஸ்.எஸ்.என்: 2155-9570
கிளாட் ஜே கியாசன், டேனியல் பெலாண்ட் மற்றும் லாங்கிஸ் மைச்சாட்
குறிக்கோள்: உயர் செயல்திறன் கொண்ட திரவ குரோமடோகிராபி (HPLC) மூலம் அளவிடப்படும் காண்டாக்ட் லென்ஸ்களில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட லைசோசைம் தொடர்பான உறிஞ்சுதல் சமிக்ஞையை பெருக்கவும்; லைசோசைமின் தூய்மை மற்றும் வெப்பக் குறைப்பு அதன் எலுஷன் சுயவிவரத்தை எவ்வளவு பாதிக்கிறது என்பதை ஆராயுங்கள்.
முறைகள்: கான்டாக்ட் லென்ஸ் சாறுகள் கணினியில் செலுத்தப்பட்ட சோதனை நிறமூர்த்த ஓட்டங்களில், 4 முதல் 5.5 நிமிடங்களுக்கு இடையில் சேகரிக்கப்பட்ட பின்னங்கள், வெஸ்டர்ன் ப்ளாட் மூலம் சுட்டிக்காட்டப்பட்ட எலுட்டிங் புரதமாக லைசோசைமை சுட்டிக்காட்டியது. 0.2% ட்ரைஃப்ளூரோஅசெட்டிக் அமிலத்தின் (TFA) 50:50 கரைசலில் காண்டாக்ட் லென்ஸில் இருந்து புரதங்கள் பிரித்தெடுக்கப்பட்டன: அசிட்டோனிட்ரைல் (ACN). ஒவ்வொரு காண்டாக்ட் லென்ஸ் சாறும் 2 அலிகோட்களாக பிரிக்கப்பட்டது. வெற்றிட ஆவியாதல் பிறகு, 8 இன் செறிவூட்டல் காரணியை உருவாக்க, அலிகோட்கள் எண் 1 ஆரம்ப மொபைல் கட்டத்தில் கரைக்கப்பட்டது. 220 nm இல் உறிஞ்சும் சமிக்ஞையின் அளவுத்திருத்தம் குரோமடோகிராம்களில் லைசோசைம் அளவை அளவிட அனுமதித்தது. HPLC க்குள் இரண்டு அலிகோட்களின் இணையான ஊசிகள் அவற்றின் லைசோசைம் உள்ளடக்கத்தை ஒப்பிட அனுமதிக்கின்றன. பிரித்தெடுக்கப்பட்ட லைசோசைமின் தூய்மை அதன் உறிஞ்சும் நிறமாலையை சிகரங்கள் முழுவதும் பார்ப்பதன் மூலம் மதிப்பிடப்பட்டது. லைசோசைம் தீர்வுகள், முன்பு 80 மற்றும் 100 டிகிரி செல்சியஸ் வரை சூடேற்றப்பட்டு, கட்டுப்பாட்டு தீர்வுகளுடன் ஒப்பிடப்பட்டன. அலிகோட்கள் எண் 1 மற்றும் 2 க்கு இடையே உள்ள இடைநிலை லைசோசைம் உள்ளடக்கத்தில் உள்ள வேறுபாடுகள் மற்றும் கட்டுப்பாட்டுடன் ஒப்பிடும்போது வெப்பப்படுத்தப்பட்ட லைசோசைமின் உச்சப் பகுதியில் உள்ள வேறுபாடுகள் அளவுரு அல்லாத முறைகள் மூலம் சோதிக்கப்பட்டன.
முடிவுகள்: செறிவூட்டப்பட்ட மற்றும் வழக்கமான சாற்றில் அளவிடப்படும் சராசரி லைசோசைம் அளவு கணிசமாக வேறுபடுகிறது (முறையே 39.8 மற்றும் 21.5 μg). இருப்பினும், வெவ்வேறு ஊசி அளவு மற்றும் செறிவூட்டும் காரணிக்கு ஒருமுறை சரிசெய்தால், சராசரி செறிவூட்டப்பட்ட லைசோசைம் அளவு (21.4 μg) வழக்கமான சாற்றில் காணப்படுவதற்கு அருகில் இருந்தது. ஸ்பெக்ட்ரல் உறிஞ்சுதலைக் கவனிப்பது, லைசோசைமை அகற்றுவது அசுத்தங்களிலிருந்து விடுபடுவதாகக் கூறுகிறது. கட்டுப்பாட்டு லைசோசைமின் உச்சப் பகுதிக்கு மேல் சூடாக்கப்பட்ட லைசோசைமின் உச்சப் பகுதிகளின் சராசரி விகிதங்கள் 100 ° C (0.91) வெப்பநிலையில் 1 இலிருந்து கணிசமாக வேறுபடுகின்றன, ஆனால் கையொப்பமிடப்பட்ட ரேங்க் சோதனையுடன் 80 ° C (0.95) இல் இல்லை. 80 டிகிரி செல்சியஸில் சூடேற்றப்பட்டாலும் கூட, லைசோசைமின் எலுஷன் சுயவிவரம் கட்டுப்பாட்டுடன் ஒப்பிடும்போது குறைவான சமச்சீராகத் தோன்றி கூடுதல் ஊடுருவல் புள்ளியை வழங்கியது. இந்த நுட்பமான மாற்றங்கள் 100 ° C இல் அதிகரிக்கப்பட்டன.
முடிவு: காண்டாக்ட் லென்ஸிலிருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட லைசோசைமின் செறிவூட்டல் மற்றும் ஆரம்ப மொபைல் கட்டத்தில் கரைக்கப்படுவது இந்த குரோமடோகிராஃபிக் செயல்முறையின் உணர்திறனை மேம்படுத்துகிறது. இந்த குரோமடோகிராஃபிக் நெறிமுறை UV உறிஞ்சும் நிறமாலையுடன் இணைந்து 80 மற்றும் 100°C இல் வெப்பக் குறைவைக் கண்டறிய முடியும்.