மரபணு பொறியியலில் முன்னேற்றங்கள்
திறந்த அணுகல்
ஐ.எஸ்.எஸ்.என்: 2169-0111
ஐ.எஸ்.எஸ்.என்: 2169-0111
Cédric Happi Mbakam
டிஸ்ட்ரோபின் மரபணுவில் ஏற்படும் பிறழ்வுகள், 100000 ஆண்களின் பிறப்புக்கு 19.8 என்ற பரவலுடன் கூடிய ஒரு கொடிய எக்ஸ்-இணைக்கப்பட்ட பரம்பரை நோயான டுச்சேன் தசைநார் சிதைவு போன்ற நரம்புத்தசை கோளாறுகளுக்கு வழிவகுக்கிறது. கார்டிகோஸ்டீராய்டுகளுடன் தற்போது கிடைக்கும் மருத்துவ சிகிச்சைகள் மார்போலினோ ஆன்டிசென்ஸ் ஒலிகோமர் ஊசி மூலம் வரையறுக்கப்பட்ட பினோடைபிக் முன்னேற்றத்தை வழங்குகிறது. எங்கள் ஆய்வு PRIME எடிட்டிங் தொழில்நுட்ப செயல்திறனை அளவிடுவதை நோக்கமாகக் கொண்டது. இந்த தொழில்நுட்பம், Cas9H840A நிக்கேஸுடன் இணைக்கப்பட்ட Moloneymurine லுகேமியா வைரஸ் தலைகீழ் டிரான்ஸ்கிரிப்டேஸிற்கான PRIME எடிட்டர் பிளாஸ்மிட் (PE2 அல்லது PE3) குறியீட்டைப் பயன்படுத்துகிறது. இது குறிப்பிட்ட நியூக்ளியோடைடு மாற்றீடுகள், நீக்குதல் அல்லது மரபணுவில் உள்ள செருகல்களை அனுமதிக்கிறது. ஒரு நியூக்ளியோடைடை மாற்றியமைப்பதன் மூலம் STOP கோடானை அறிமுகப்படுத்த பல hDMD எக்ஸான்களை (9, 20, 35,43, 51, 55, மற்றும் 61) குறிவைத்து வெவ்வேறு பெக்ஆர்என்ஏக்களை வடிவமைத்தோம். HEK293T செல்கள் PE2 மற்றும் pegRNA உடன் ஒரே நேரத்தில் மாற்றப்பட்ட மூன்று நாட்களுக்குப் பிறகு DMEM கலாச்சார ஊடகத்திலிருந்து அறுவடை செய்யப்பட்டன. சாங்கர் முறையைப் பயன்படுத்தி எக்ஸான்ஸ் பிசிஆர் பெருக்கப்பட்டு வரிசைப்படுத்தப்பட்டது. எடிட்டிங் சதவீதத்தை மதிப்பிடுவதற்கு எடிட்ஆர் நிரலைப் பயன்படுத்தி முடிவுகள் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. 6 முதல் 11 % (PE2) மற்றும் 21% (PE3) வரையிலான எடிட்டிங் செயல்திறனுடன் DMD மரபணுவில் குறிப்பிட்ட C முதல் T மற்றும் G க்கு T மாற்றீடுகளை PRIME எடிட்டிங் அனுமதிக்கிறது என்பதை உறுதிப்படுத்தினோம். முதல் 15 % வரை காட்டப்பட்ட 6 நாட்களுக்குப் பிறகு மீண்டும் மீண்டும் இடமாற்றம் செய்யப்பட்டது ( PE2) எக்ஸான்ஸ் 9 மற்றும் 35 இல் பதிப்பு. PAM வரிசையின் கூடுதல் பிறழ்வு (எக்ஸான் 35) மேம்படுத்தப்பட்டது ஒற்றை இடமாற்றத்திற்கு PE2 முடிவு 38%. எனவே, பிரைம் எடிட்டிங் டிஎம்டி மரபணுவில் குறிப்பிட்ட மாற்றீடுகளை அனுமதிக்கிறது மற்றும் டிஎம்டி மரபணுவில் உள்ள புள்ளிமாற்றங்களை சரிசெய்து டிஸ்ட்ரோபின் வெளிப்பாட்டிற்கு வழிவகுக்கும்.