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ऑक्सीजन-प्रेरित रेटिनोपैथी (OIR) मॉडल में रेटिना वाहिकाओं को अलग करने के लिए एक दोहरी-धुंधला विधि

लिंग ज़ू, पिंग हू, ये झांग, जिनयी लॉन्ग, ज़ू वू, युहोंग ये, निंग कुई, फ़ेई सन, ज़िनमिन लू, जिकुई शेन, दा लॉन्ग

उद्देश्य: इस अध्ययन का उद्देश्य ऑक्सीजन-प्रेरित रेटिनोपैथी (ओआईआर) चूहों में रेटिना संरचनात्मक वाहिकाओं, नियोवैस्कुलराइजेशन (एनवी), और गैर-छिड़काव (एनपी) क्षेत्रों में अंतर करने के लिए समय-बचत, लागत-प्रभावी और श्रम-बचत विधि में सुधार करना था।

विधियाँ: C57BL/6J चूहों को प्रसवोत्तर दिन 7 (P7) से P12 तक हाइपरऑक्सिक स्थितियों (75% ± 2% O ₂ ) के संपर्क में रखा गया और फिर अधिकतम रेटिनल नियोवैस्कुलराइजेशन (NV) उत्पन्न करने के लिए कमरे की हवा में वापस लाया गया। P17 पर रेटिना को अलग करने के बाद, रेटिना के पूरे माउंट को समय और सांद्रता-नियंत्रित धुंधलापन विधियों का उपयोग करके ग्रिफ़ोनिया सिंपलिसिफ़ोलिया लेक्टिन (GSL) IB4-594 और GSL IB4-FITC के साथ क्रमिक रूप से दाग दिया गया। इस बेहतर विधि में केवल दो धुंधलापन माध्यमों का उपयोग किया गया और किसी अन्य अवरोधन माध्यम की आवश्यकता नहीं थी। छवियों को प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा प्राप्त किया गया और एडोब फोटोशॉप द्वारा मर्ज किया गया। रेटिना नियोवैस्कुलराइजेशन क्षेत्र और गैर-छिड़काव क्षेत्र को इमेज-प्रो प्लस द्वारा मापा गया।

परिणाम: 45 मिनट के लिए 1:100 पर GSL IB4-594 की सांद्रता के साथ धुंधलापन लगभग सभी नव संवहनी टफ्ट्स को पूरी तरह से दाग सकता है, जो रेटिना नव संवहनीकरण की विश्वसनीय और सुसंगत स्थिति का आकलन कर सकता है। इस बीच, OIR रेटिना पूरे माउंट को रात भर 1:100 पर GSL IB4-FITC की सांद्रता के साथ दाग दिया गया, उसके बाद GSL IB4-594 धुंधलापन ने OIR चूहों में रेटिना गैर-छिड़काव क्षेत्रों, संरचनात्मक वाहिकाओं और नव संवहनी टफ्ट्स की आसान पहचान और मात्रा का निर्धारण करने की अनुमति दी।

निष्कर्ष: OIR मॉडल में NV और NP का आकलन करने के लिए एक पुनरुत्पादनीय और मात्रात्मक रेटिनल डुअल-स्टेनिंग का उपयोग एक उपयुक्त स्टेनिंग विधि के महत्व को दर्शाता है जो NV और NP के अनुपात की आसानी से गणना कर सकता है। इस पद्धति का उपयोग करके प्राप्त एंटी-एंजियोजेनेसिस के लिए द्वि-विशिष्ट पेप्टाइड्स की एंटी-एंजियोजेनेसिस प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने जैसे अन्य परिणाम उन्नत नैदानिक ​​और वैज्ञानिक अनुसंधान मूल्य का सुझाव देते हैं कि रेटिनल डुअल-स्टेनिंग का उपयोग करके NV और NP के अनुपात को आसानी से पहचाना जा सकता है।