ஜர்னல் ஆஃப் பார்மாசூட்டிகல் கேர் & ஹெல்த் சிஸ்டம்ஸ்
திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

siRNA டெலிவரிக்காக மைக்ரோஃப்ளூய்டிக் கலவையால் தயாரிக்கப்பட்ட சத்தம் நானோ துகள்களின் செயல்முறை

முஹம்மது ஏ. ஒபீட்

ஆர்என்ஏ குறுக்கீடு குறுகிய குறுக்கீடு ஆர்என்ஏக்கள் (siRNA) [1] ஒருங்கிணைப்பதன் மூலம் இலக்கு தூதுவர் ஆர்என்ஏவின் சிதைவை உள்ளடக்கியது. RNA குறுக்கீடு (RNAi), மிகவும் பிரபலமான உயிரியல் கருவியாகும், இதன் மூலம் இரட்டை இழைகள் கொண்ட RNA (dsRNA) சீரழிவுக்கான நிரப்பு mRNA ஐ இலக்காகக் கொண்டு மரபணு அமைதியைத் தூண்டுகிறது, இது நோய்க்கான உலகளாவிய சிகிச்சை கையாள்வதில் மற்றும் ஆராய்ச்சியாளர்கள் மரபணு செயல்பாட்டைப் படிக்கும் முறையை மாற்றியமைப்பதில் ஒரு மகத்தான கண்டுபிடிப்பு ஆகும். எண்டோஜெனஸ் ஆர்என்ஏ மின்மறுப்பின் துணை அணு கூறுகள் பற்றிய தகவலை விரிவுபடுத்துகிறது, siRNA கள் கொடிய நோய்களுக்கான சிகிச்சைக்கான கற்பனையான நியூக்ளிக் அரிக்கும் மருந்துகளாக உருவாகின்றன, எடுத்துக்காட்டாக, வீரியம் மிக்க வளர்ச்சிகள்.

சிறிய குறுக்கிடும் ஆர்என்ஏக்கள் (siRNAகள்) தவறாக வழிநடத்தும் வகையில் 19-23 நியூக்ளியோடைடு நீண்ட இரு மடங்கு கைவிடப்பட்ட RNA அணுக்கள். சூழ்ச்சியின் தரத்தை தற்காலிகமாக அமைதிப்படுத்த துணை அணு அறிவியலில் அவை வழக்கமாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. அவை வாரிசு நிரப்புத்தன்மையைச் சார்ந்து அவற்றின் புறநிலை டிரான்ஸ்கிரிப்டுக்கு அதிகாரப்பூர்வமான பிறகு RNAi எதிர்வினையை ஊக்குவிக்கின்றன. திறன் இழப்பின் மூலம் வெவ்வேறு புற்றுநோயியல் எல்என்சிஆர்என்ஏக்களின் தாக்கத்தைப் பற்றி சிந்திக்க அவை சரியான முறையில் பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளன.

siRNA ஆனது தீவிர நோய்களுக்கு முன்னதாகவே சிகிச்சையளிப்பதற்கான கண்டுபிடிப்பு மருந்துகளின் முன்னேற்றத்திற்கு புதிய வாய்ப்புகளை வழங்கியுள்ளது, எடுத்துக்காட்டாக, வீரியம் மிக்க வளர்ச்சி. இது இயற்கையான தீவிரத்தன்மை கொண்டது, ஏனெனில் இது எண்டோஜெனஸ் ஆர்என்ஏஐ பாதையை தவறாகப் பயன்படுத்துகிறது, நோய் தொடர்பான குணங்களை வெளிப்படையாகக் குறைக்க அனுமதிக்கிறது, மேலும் ஒரு தொடர்பு ஏற்பாட்டுடன் எந்தத் தரத்திற்கும் ஏற்றது. siRNA- தலையிடப்பட்ட தரமான சிகிச்சையின் அடிப்படையில், நோயின் பரம்பரை தன்மை வலுவான உதவியை வழங்குகிறது. உண்மையைச் சொல்வதானால், பல்வேறு siRNA கள் முதன்மையான புற்றுநோயியல்கள், புற்றுநோயுடன் தொடர்புடைய வைரஸ் புற்றுநோய்கள் அல்லது நடைமுறையில் இயக்கப்பட்ட புற்றுநோயியல் மரபணுக்களை குறிவைக்கும் நோக்கம் கொண்டவை.

பொறிமுறை:

ஆர்.என்.ஏ.ஐயின் ஆரம்பப் படியானது, நீண்ட இருமடங்கு கைவிடப்பட்ட ஆர்.என்.ஏ.வை சிஆர்என்ஏக்களாகக் கையாளுதல் மற்றும் பிளவுபடுத்துதல் ஆகியவை அடங்கும். இந்தக் கையாளுதலுக்குப் பதிலளிக்கக்கூடிய புரதம் டைசர் எனப்படும் RNase III போன்ற வினையூக்கி ஆகும். வடிவமைக்கப்படும் போது, ​​siRNAகள் RISC (RNAinduced hushing complex) என குறிப்பிடப்படும் மல்டிபுரோட்டீன் பகுதி வளாகத்தால் வரையறுக்கப்படுகின்றன. RISC வளாகத்தின் உள்ளே, siRNA இழைகள் தனிமைப்படுத்தப்பட்டு, மேலும் நிலையான 5′-முடிவு கொண்ட இழையானது பொதுவாக மாறும் RISC வளாகத்துடன் இணைக்கப்படுகிறது. அந்த கட்டத்தில் ஆன்டிசென்ஸ் ஒற்றை-கைவிடப்பட்ட siRNA பகுதி, புறநிலை mRNA மீது RISC வளாகத்தை கட்டுப்படுத்துகிறது மற்றும் சரிசெய்கிறது மற்றும் சினெர்ஜிஸ்ட் RISC புரதத்தின் செயல்பாட்டின் மூலம், argonaute குடும்பத்தைச் சேர்ந்த (Ago2), mRNA துண்டிக்கப்பட்டது.

முறைகள்:

என்ஐஎஸ்வி மைக்ரோஃப்ளூய்டிக் கலவையால் அமைக்கப்பட்டது, இது லிப்பிட் அடிப்படையிலான நானோ துகள்களைப் பெறுவதற்குப் பயன்படுத்தப்படும் தாமதமாக உருவாக்கப்பட்ட நுட்பமாகும், மேலும் மறுசீரமைப்பு ஆபரேட்டரின் பயனுள்ள எடுத்துக்காட்டுடன் சிறிய வெசிகிள்களை உருவாக்குகிறது. என்ஐஎஸ்வியை தயார்படுத்த, லிப்பிட் கட்டத்தை அமைக்க, என்ஐஎஸ்வி பாகங்களின் ஒவ்வொரு பங்கு ஏற்பாட்டிலிருந்தும் வெளிப்படையான தொகுதிகள் இணைக்கப்பட்டன. லிப்பிட் நிலை பிரதான வளைகுடாவிலும், திரவ நிலை மைக்ரோஃப்ளூய்டிக் மைக்ரோமிக்சரின் இரண்டாவது விரிகுடாவிலும் செலுத்தப்பட்டது, கலப்பு வெப்பநிலை 50 டிகிரி செல்சியஸில் அமைக்கப்பட்டது. நீர்நிலை மற்றும் இயற்கை நிலைக்கு இடையே ஸ்ட்ரீம் வீத விகிதங்கள் (FRR) 3:1 ஆகவும், இரண்டு நிலைகளின் ஆல் அவுட் ஸ்ட்ரீம் வீதங்கள் (TFR) 12 மிலி/நிமிடமாகவும் அமைக்கப்பட்டது. இது உயர் ஸ்ட்ரீம் விகிதங்களில் மற்றும் லிப்பிடுகளின் நிலை முன்னேற்றத்தின் மீது வெப்பநிலையில் இரண்டு நிலைகளுக்கு இடையே விரைவான கலவையை கருத்தில் கொள்கிறது. அவுட்லெட் ஸ்ட்ரீமில் இருந்து சிதறல்கள் சேகரிக்கப்பட்டு, திட்டமிடலில் கடைசி எத்தனால் உள்ளடக்கத்தை 6.25% (v/v) ஆகக் குறைக்கும் வகையில் விரைவாக வலுவிழக்கச் செய்யப்பட்டது. NISV இன் சைட்டோடாக்சிசிட்டி மதிப்பீடு சிறிய நுரையீரல் வீரியம் இல்லாத செல்கள் (A549) மற்றும் மவுஸ் மெலனோமா செல்கள் (B16-F10-LUC) ஆகியவற்றில் முடிக்கப்பட்டது. siRNA, copGFP-A549 கலங்களில் பச்சை ஒளிரும் புரதம் (GFP) மீது கவனம் செலுத்துகிறது, அல்லது B16-F10-LUC கலங்களில் லூசிஃபெரேஸ் NISV இல் வகைப்படுத்தப்பட்டது. NISV ஐப் பயன்படுத்தி GFP siRNA (siGFP) க்கு எதிரான GFP உச்சரிப்பு கட்டுப்பாடு ஸ்ட்ரீம் சைட்டோமெட்ரி, பாலிமரேஸ் செயின் ரெஸ்பான்ஸ் மற்றும் வெஸ்டர்ன் ஸ்மட்ஜிங் மூலம் மதிப்பிடப்பட்டது. நிர்வாண BALB/c எலிகளுக்கு B16-F10-LUC செல்கள் மூலம் தடுப்பூசி போடப்பட்டது, இது மெலனோமா லூசிஃபெரேஸைத் தொடர்புகொள்வதைத் தூண்டுகிறது, இது விவோவில் siRNA ஐ வெளிப்படுத்துவதற்கான NISV திறனை ஆய்வு செய்ய பயன்படுத்தப்பட்டது.

முடிவுகள்:

சைட்டோடாக்சிசிட்டி NISV 40 µg/ml அல்லது அதற்குக் கீழே தீங்கு விளைவிப்பதில்லை என்பதை நிரூபித்துள்ளது. NISV வரையறைகள் உயர் siRNA எடுத்துக்காட்டு செயல்திறனைக் கொண்டிருந்தன. ஃப்ளோரசன்ட் உருப்பெருக்கி லென்ஸ் மற்றும் ஸ்ட்ரீம் சைட்டோமெட்ரி ஆகியவை உயிரணுக்களால் எடுக்கப்படாத வெற்று siRNA உடன் மாறுபட்ட செல்கள் மூலம் உயர் செல் எடுப்பதை நிரூபித்ததாகக் கருதுகிறது. NISV ஆனது செல்களுக்கு siGFP ஐ தெரிவிப்பதற்கும் GFP உச்சரிப்பை முழுவதுமாக அடக்குவதற்கும் விருப்பம் கொண்டிருந்தது. லூசிஃபெரேஸ் siRNA (siLUC) க்கு எதிராக B16-F10-LUC செல்களை உருவாக்கும் லூசிஃபெரேஸை மாற்றுவதன் மூலம் இந்த முடிவுகள் உறுதிப்படுத்தப்பட்டன. லூசிஃபெரேஸ் புரோட்டீன் அளவீட்டு கட்டமைப்பைப் பயன்படுத்தி siLUC இடமாற்றங்களுக்குப் பிறகு லூசிஃபெரேஸ் உச்சரிப்பின் அளவை மதிப்பிடுவது லூசிஃபெரேஸ் உச்சரிப்பின் மறைவை திறம்பட வெளிப்படுத்தியது. NISV பின்னர் நிர்வாண BALB/c எலிகளைப் பயன்படுத்தி விவோ சோதனைகளில் பயன்படுத்தப்பட்டது. உள்-கட்டி உட்செலுத்தலுக்குப் பிறகு, siLUC உயிரணுக்களுக்கு அனுப்பப்பட்டது மற்றும் வெளிப்படும் siLUC உடன் வெகுமதி அளிக்கப்பட்ட எலிகளைக் காட்டிலும் அடிப்படையில் மிகவும் உயர்ந்த மட்டத்தில் லூசிஃபெரேஸ் உச்சரிப்பு முடக்கப்பட்டது. இந்த விவோ விளைவுகளில், புறநிலை உயிரணுக்களின் சைட்டோபிளாஸத்தில் siRNA ஐ திறம்பட வெளிப்படுத்தவும் மற்றும் புறநிலை புரதத்தை முடக்கவும் NISV இன் திறனை உறுதிப்படுத்துகிறது.

முடிவு:

என்ஐஎஸ்வி பரந்த அளவில் காட்சிப்படுத்தப்பட்டுள்ளது மற்றும் siRNAக்கான ஒரு கடத்தல் கட்டமைப்பாகப் பயன்படுத்தப்படலாம் என்பதால். siRNA-அடிப்படையிலான சிகிச்சை முறைகளில் குறைந்த நிலைத்தன்மை மற்றும் மோசமான செல் எடுத்துக்கொள்வது போன்ற தடைகளைத் தோற்கடிக்க NISV பயன்படுத்தப்படலாம் என்பதை இந்த முடிவுகள் சுட்டிக்காட்டுகின்றன.