ஜர்னல் ஆஃப் புரோட்டியோமிக்ஸ் & பயோ இன்ஃபர்மேடிக்ஸ்
திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

MED12/MED12L, MED13/13L மற்றும் CDK8/19 பாராலாக்ஸின் பரஸ்பர பிரத்தியேகத்தன்மை CDK-Mediator Kinase தொகுதிக்குள் வெளிப்படுத்தப்பட்டது

Danette L. Daniels, Michael Ford, Marie K. Schwinn, Hélène Benink, Matthew D.Galbraith, Ravi Amunugama, Richard Jones, DavidAllen, NorikoOkazaki, Hisashi Yamakawa, Futaba Miki, Takahiro Nagase, Joaquín M.Espinosa and Marjeta Urh

டிஎன்ஏ-பிணைப்பு புரதங்கள், குறியீட்டு அல்லாத ஆர்என்ஏக்கள் மற்றும் குரோமாடின் மூலம் ஆர்என்ஏ பாலிமரேஸ் II (ஆர்என்ஏபிஐஐ) செயல்பாட்டை ஒழுங்குபடுத்துவதில் மேக்ரோமாலிகுலர் காம்ப்ளக்ஸ் மீடியேட்டர் முக்கிய பங்கு வகிக்கிறது. கட்டமைப்பு மற்றும் உயிர்வேதியியல் ஆய்வுகள் மனித மத்தியஸ்தர் இரண்டு வடிவங்களில் இருப்பதைக் காட்டுகின்றன; 26 புரதங்களின் மைய வளாகம், மீடியேட்டர் என அழைக்கப்படுகிறது, மேலும் CDK8 கைனேஸ் தொகுதி கொண்ட பெரிய வளாகம், CDK8-Mediator என்று அழைக்கப்படுகிறது. சுவாரஸ்யமாக, கைனேஸ் தொகுதியின் 3 துணைக்குழுக்கள் MED12/MED12L, MED13/ MED13L மற்றும் CDK8/CDK19 ஆகிய பாராலாக் ஜோடிகளை உருவாக்க முதுகெலும்புகளில் சுயாதீன மரபணு நகல்களுக்கு உட்பட்டுள்ளன. ஒவ்வொன்றும் மீடியேட்டருடன் தொடர்புகொள்வதாகக் காட்டப்பட்டுள்ளது, இருப்பினும் CDK கைனேஸ் தொகுதியின் கலவையை தெளிவாக வரையறுப்பது பெரிய அளவு (~600 kD), பாராலாக்களுக்கு இடையிலான ஒற்றுமைகள் மற்றும் வளாகங்களின் சாத்தியமான ஒருங்கிணைந்த தன்மை காரணமாக சவாலாக உள்ளது. இந்த ஆய்வில், ஒவ்வொரு கைனேஸ் தொகுதி உறுப்பினரையும் (MED12, MED12L, MED13, MED13L, CDK8, CDK19 மற்றும் Cyclin C) மற்றும் HEK293T கலங்களிலிருந்து அவர்களின் ஊடாடும் கூட்டாளர்களையும் தனிமைப்படுத்த HaloTag தொழில்நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தி முறையான புரோட்டியோமிக் பகுப்பாய்வு செய்தோம். LC-MS/MS ஐப் பயன்படுத்தி, தனித்துவமான பெப்டைட்களின் குறிப்பிட்ட பகுப்பாய்வு மூலம் மாதிரிகளில் உள்ள பாராலாக்ஸை வேறுபடுத்த முடிந்தது. சிடிகே மீடியேட்டரில் பரஸ்பரம் பிரத்தியேகமான முறையில் பாராலாக்ஸ் ஒன்று சேர்வதைக் கண்டறிந்தோம், இதன் மூலம் சிடிகே தொகுதியின் எட்டு வெவ்வேறு அசெம்பிளிகள் வரை, மீடியேட்டர் வளாகங்களின் செயல்பாட்டு நிபுணத்துவத்திற்கான சாத்தியக்கூறுகள் உள்ளன. சுவாரஸ்யமாக, MED13L வளாகங்கள் MED26 துணைப்பிரிவைக் கொண்டு செல்வதைக் கண்டறிந்தோம், இது CDK-Mediator இல் இல்லாததாகவோ அல்லது மிகக் குறைந்த அளவில் இருப்பதாகவோ காட்டப்பட்டுள்ளது. மத்தியஸ்தர் வளாகத்தின் இந்த தனித்துவமான மாறுபாடு, RNAPII நீட்டிப்பின் நேர்மறையான கட்டுப்பாட்டில் MED26 மற்றும் CDK8க்கான பாத்திரங்களை நிரூபிக்கும் சமீபத்திய அவதானிப்புகளை சரிசெய்யலாம். இந்தத் தரவுகள் CDK-Mediator வளாகங்கள் மற்றும் கலவை பற்றிய புரிதலை விரிவுபடுத்துகின்றன.