ஜர்னல் ஆஃப் புரோட்டியோமிக்ஸ் & பயோ இன்ஃபர்மேடிக்ஸ்
திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

மனித செரிப்ரோஸ்பைனல் திரவத்தில் பயோமார்க்ஸர்களை லேபிள்-இலவச LC-MS/MS அடையாளப்படுத்தலுக்கான ஹைட்ரோபோபிக், லிபோபிலிக் மற்றும் இம்யூனோடெபிலிஷன் ப்ரீ-ஃப்ராக்ஷனேஷன் முறைகளின் ஒப்பீடு

சில்வைன் லெஹ்மன், ஜெரோம் வியாலரெட், மார்ஷியல் செவெனோ, லாரன்ட் டயர்ஸ், ஆட்ரி கேபெல் மற்றும் கிறிஸ்டோஃப் ஹிர்ட்ஸ்

பின்னணி: மனித செரிப்ரோஸ்பைனல் திரவத்தின் (CSF) புரோட்டியோமிக்ஸ் பகுப்பாய்வு என்பது நரம்பியல் நோய்களுக்கான நாவல் பயோமார்க்ஸர்களை அடையாளம் காண்பதற்கான ஒரு முக்கிய கருவியாகும். இருப்பினும், CSF இன் சிக்கலான தன்மை மற்றும் பரந்த டைனமிக் வரம்பு குறிப்பிட்ட குறைந்த மிகுதியான பயோமார்க்ஸர்களைக் கண்டறிவதில் பெரும் சவாலாக உள்ளது. இந்த சிக்கலைச் சமாளிப்பதற்கான ஒரு வழி, வெவ்வேறு முன்-பிரிவு நுட்பங்களை நம்புவதாகும். இருப்பினும், மிகவும் பொருத்தமான நுட்பம் தீர்மானிக்கப்பட உள்ளது.

முறைகள்: இந்த ஆய்வு மூன்று வெவ்வேறு நன்கு அறியப்பட்ட முன்-பிரிவு முறைகளை ஒப்பிட்டது: முக்கிய புரதங்களின் நோயெதிர்ப்பு-குறைப்பு (Seppro® IgY14), ஹைட்ரோபோபிக் திட கட்ட பிரித்தெடுத்தல் (Oasis® HLB) மற்றும் லிபோபிலிக் சோர்பென்ட் செறிவு (லிபோசார்ப்™). பிரிக்கப்படாத மற்றும் முன்-பிரிக்கப்பட்ட CSF டிரிப்சினுடன் செரிக்கப்பட்டது மற்றும் ஆர்பிட்ராப் TM மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமீட்டர் மூலம் RP-LC-MS/ MS ஆல் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. கண்டறியப்பட்ட பெப்டைட்களின் எண்ணிக்கை மற்றும் அடையாளம் காணப்பட்ட புரதங்களின் தொகுப்புகளை நாங்கள் ஆவணப்படுத்தினோம். முன்-பகுப்பாய்வு மற்றும் பகுப்பாய்வு மாறுபாட்டைக் குறைக்க சோதனைகள் மீண்டும் மீண்டும் செய்யப்பட்டன.

முடிவுகள்: பிரிக்கப்படாத CSF உடன் ஒப்பிடும்போது, ​​OASIS® HLB fractionated CSF முறையானது, அடையாளம் காணப்பட்ட மொத்த புரதங்களின் எண்ணிக்கையில் குறிப்பிடத்தக்க 28% அதிகரிப்பைக் காட்டியது, அதே சமயம் Liposorb™ பிடிப்பு குறிப்பிடத்தக்க 46% குறைந்துள்ளது. சுவாரஸ்யமாக, கண்டறியப்பட்ட பெப்டைட்களின் எண்ணிக்கையின் அடிப்படையில் முடிவுகள் வேறுபட்டன. மூலக்கூறு எடை, ஐசோ எலக்ட்ரோஃபோரெடிக் புள்ளி (IEP) அல்லது இயற்கையின் அடிப்படையில் வெவ்வேறு புரதங்களைக் கண்டறிய இந்த முன்-பிரிவு முறைகளின் திறனையும் மதிப்பீடு செய்தோம். பிரிக்கப்படாத CSF மற்றும்/அல்லது பிற முறைகளுடன் ஒப்பிடும் போது, ​​இந்த முன்-பிரிவு முறைகள் ஒவ்வொன்றும் புரதங்களின் ஒரு குறிப்பிட்ட துணைக்குழுவை அடையாளம் கண்டுள்ளன. லிபோபிலிக் சோர்பெண்டிற்கு இது குறிப்பாகத் தெளிவாக இருந்தது, இது பல லிப்போபுரோட்டீன்களைக் கண்டறிய அனுமதித்தது.

முடிவு: செரிக்கப்பட்ட CSF இன் நேரடி பகுப்பாய்வு மேட்ரிக்ஸ் சிக்கலான போதிலும் பல புரதங்களை அடையாளம் காண வழிவகுத்தது. எதிர்பார்த்தபடி, எளிய மற்றும் செலவு குறைந்த பணிப்பாய்வுகளில் சேர்க்கக்கூடிய ஒற்றை முன்-பிரிவு முறைகள், எண்ணிக்கை அல்லது புரதங்களின் வரம்பில் குறிப்பிடத்தக்க வேறுபாடுகளை அளித்தன. ஒரு சிக்கலான மாதிரியில் இருக்கும் முழு அளவிலான புரத இனங்களை ஒரு முன்-பிரிவு முறை மறைக்க முடியாது என்று இது அறிவுறுத்துகிறது.