ஆன்டிவைரல்ஸ் & ஆன்டிரெட்ரோவைரல்ஸ் ஜர்னல்
திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

பாலூட்டிகளின் செல்-கோடுகளுக்குள் முழு நீளம் மற்றும் எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் டொமைன் EBOV கிளைகோபுரோட்டின் மறுசீரமைப்பு வடிவங்களின் குளோனிங், வெளிப்பாடு மற்றும் சுத்திகரிப்பு

மிசாகி வைங்கேரா, பீஸ் பாபிரியே, கரோல் முசுபிகா, சாமுவேல் கிரிமுண்டா, மோசஸ் எல். ஜோலோபா

பின்னணி: முழு நீள எபோலாவைரஸ் கிளைகோபுரோட்டீன் (ஜிபி) வெளிப்புற லிப்பிட் சவ்வை குறுக்கிட்டு கூர்முனைகளை உருவாக்குகிறது, அங்கு அது வைரஸ்-ஹோஸ்ட் செல் தொடர்புக்கு மத்தியஸ்தம் செய்கிறது. GP (sGP) இன் சுரப்பு வடிவம் அனைத்து அறியப்பட்ட 5 எபோலா வைரஸ் இனங்களாலும் தயாரிக்கப்படுகிறது . இந்தப் பண்புக்கூறுகள் எபோலாவைரஸின் ஆராய்ச்சி மற்றும் மேம்பாட்டிற்கான (ஆர் மற்றும் டி) சிறந்த இலக்காக ஜிபியை உருவாக்குகின்றன மற்றும் பான்-ஃபிலோவைரஸ் இலக்கு ரேபிட் நோயறிதல் சோதனைகள் (ஆர்டிடி), உயிர் சிகிச்சை மற்றும் தடுப்பூசிகள். மறுசீரமைப்பு Zaire ebolavirus ( EBOV ) GP இன் முந்தைய குளோனிங் முக்கியமாக பூச்சி ( பாகுலோவைரஸ் ) வெளிப்பாடு அமைப்புகளைப் பயன்படுத்தியது . பாலூட்டிகளின் செல்-லைன்களில் மறுசீரமைப்பு EBOV GPயின் முழு நீளம் மற்றும் எக்ஸ்ட்ராசெல்லுலர் டொமைன் (ECD) வடிவங்களின் குளோனிங், வெளிப்பாடு மற்றும் சுத்திகரிப்பு ஆகியவற்றை நாங்கள் புகாரளிக்கிறோம்.

முறைகள் மற்றும் முடிவுகள்: 2034 மற்றும் 1956 அடிப்படை ஜோடி (bp) குறியீட்டு DNA வரிசைகள் 669 மற்றும் 643 அமினோ அமிலங்கள் (aa) முழு நீள எச்சங்கள் மற்றும் EBOV GP இன் ECD வடிவங்கள் pTGE பிளாஸ்மிட்களில் துணை குளோன் செய்யப்பட்டன. சீரம் இல்லாத ஃப்ரீஸ்டைல்TM 293 எக்ஸ்பிரஷன் மீடியத்தில் வளர்க்கப்பட்ட 293-6E HEK பாலூட்டிகளின் செல்களை மாற்ற மறுசீரமைப்பு pTGE-பிளாஸ்மிடுகள் பயன்படுத்தப்பட்டன. சுத்திகரிக்கப்பட்ட புரதத்தைப் பெற செல் லைசேட்டுகள் மற்றும் கலாச்சார சூப்பர்நேட்டண்டுகள் பயன்படுத்தப்பட்டன, அதைத் தொடர்ந்து SDS-PAGE மற்றும் வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டில் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டில் ~100 kDa (Cal.MW~71.67 kDa) மூலக்கூறு எடையுடன் செல் லைசேட்டுகளில் சவ்வு பிணைக்கப்பட்ட புரதமாக சுத்திகரிக்கப்பட்ட முழு நீள GP கண்டறியப்பட்டது; மற்றும் 0.02 mg GP (செறிவு: 0.2 mg/mL, தூய்மை: ~50%) பெறப்பட்டது. மாறாக, ECD GP ஆனது SDS-PAGE மற்றும் வெஸ்டர்ன் ப்ளாட்டின் அடிப்படையில் மதிப்பிடப்பட்ட ~116 kDa மூலக்கூறு எடையுடன் செல் கலாச்சாரக் குழம்பின் சூப்பர்நேட்டன்ட்களில் கண்டறியப்பட்டது; மற்றும் 1.6 mg (செறிவு: 0.4 mg/ml, தூய்மை: ~70%) GP_ECD பெறப்பட்டது.

முடிவு: பாலூட்டிகளின் உயிரணுக்களுக்குள், மறுசீரமைப்பு முழு நீள EBOV GP முக்கியமாக டிரான்ஸ்மெம்பிரேன் புரதமாக (tGP) வெளிப்படுத்தப்படுகிறது, அதே நேரத்தில் ECD GP கலாச்சார ஊடகத்தில் வெளியேற்றப்படுகிறது. GP இன் இரண்டு மறுசீரமைப்பு வடிவங்களும் R மற்றும் D விரைவான கண்டறியும் சோதனைகளுக்கு (RDTs) முக்கியமானவை.