ஜர்னல் ஆஃப் புரோபயாடிக்ஸ் & ஹெல்த்
திறந்த அணுகல்

சுருக்கம்

ஃப்ளோரசன்ட் ஸ்டைனிங் மற்றும் ஃப்ளோரசன்ஸ் மைக்ரோஸ்கோபி மூலம் புரோபயாடிக் லாக்டோபாகிலஸ் அமிலோபிலஸின் செல் சுவர் ஒருமைப்பாடு மற்றும் புரோட்டோபிளாஸ்ட் உருவாக்கம்

ரியான் பேஜ், டேவிட் பர்க், கயானுஷ் ஆர்யானா

பாக்டீரியல் செல்களின் புரோட்டோபிளாஸ்டை அடையாளம் காண்பது முன்பு கட்ட மாறுபாடு நுண்ணோக்கியைப் பயன்படுத்தியது. இந்த முறை புரோட்டோபிளாஸ்டை அவற்றின் அளவு மற்றும் வடிவ மாற்றத்தால் தீர்மானிக்கிறது. குறிப்பிட்ட செல்லுலார் கூறுகளை குறிவைக்கும் ஃப்ளோரசன்ட் கறைகளைப் பயன்படுத்தி மிகவும் சரிபார்க்கக்கூடிய முறையைப் பயன்படுத்தலாம். இந்த ஆய்வின் குறிக்கோள், செல் சுவர் செரிமான நொதிகளின் வெளிப்பாட்டிற்குப் பிறகு, புரோபயாடிக் லாக்டோபாகிலஸ் அமிலோபிலஸில் பாக்டீரியா செல் சுவர்களின் இருப்பு அல்லது இல்லாமையைக் கண்டறிய ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கி நுட்பங்களைப் பயன்படுத்துவதாகும். பாக்டீரியா செல்கள் லைசோசைமின் வெவ்வேறு செறிவுகளுடன் [0, 175, 250, 425 μg/ml] சிகிச்சை அளிக்கப்பட்டு பத்து நிமிடங்களுக்கு 37°C வெப்பநிலையில் அடைகாக்கப்பட்டன. பின்வரும் லைசோசைம் சிகிச்சை செல்கள் வெவ்வேறு செறிவுகளுடன் (1x, 2x, 10x மற்றும் 100x), கோதுமை கிருமி அக்லுட்டினின் (WGA) மற்றும் Hoechst 33342 ஆகியவற்றின் வெவ்வேறு செறிவுகளுடன் (1x, 2x, 10x மற்றும் 100x) படிந்துள்ளது. WGA [CF ^® ], 594 WGA தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட முறையில் பயன்படுத்தப்பட்டது செல் சுவரின் பெப்டிடோக்ளிகான் அடுக்கின் எச்சங்களுடன் பிணைக்கப்பட்டது மற்றும் ஹோச்ஸ்ட் 33342, ஒரு நீல ஒளிரும் சாயம், குறிப்பாக பாக்டீரியா உயிரணுக்களின் இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏவின் நியூக்ளிக் அமிலங்களுடன் பிணைக்கப் பயன்படுத்தப்பட்டது. ஃப்ளோரசன்ஸ் நுண்ணோக்கிக்கான மாதிரி தயாரிப்புக்கான நிலையான முறை பின்பற்றப்பட்டது. ஒவ்வொரு லைசோசைம் மற்றும் கறை கலவைக்கும் மூன்று துறைகள் ஆய்வு செய்யப்பட்டன. லைசோசைம் செறிவுகளில் உள்ள வேறுபாடுகளைக் கண்டறிய ஒரு வழி ANOVA செய்யப்பட்டது. ஒரு p-மதிப்பு <0.05 கணிசமாக வேறுபட்டதாகக் குறிப்பிடப்பட்டது. செல் சுவர் கட்டமைப்பு ஒருமைப்பாடு 175 மற்றும் 250 μg/ml லைசோசைம் மற்றும் செல் சிதைவு மற்றும் 425 μg/ml என்ற செறிவில் டிஎன்ஏவின் ஸ்ட்ரைேஷன்கள் மோசமடையத் தொடங்கியது. லைசோசைம் செறிவு 175 μg/ml சராசரியாக 41% புரோட்டோபிளாஸ்ட் அல்லது செல் சுவரின் பகுதி செரிமானத்தை உருவாக்கியது. லைசோசைமின் செறிவு 175 முதல் 250 μg/ml வரை அதிகரித்ததன் விளைவாக புரோட்டோபிளாஸ்டின் சராசரி சதவீதம் (4%) குறைந்தது. 425 μg/ml செறிவில், புரோட்டோபிளாஸ்டின் சராசரி சதவீதம் 1% ஆகக் குறைந்துள்ளது, அதே நேரத்தில் டிஎன்ஏவின் ஸ்ட்ரைஷன்களில் அதிகரிப்பையும் காட்டுகிறது. 1x சாய செறிவில், செல் சுவரின் பகுதி கறை காணப்பட்டது. 2x இல், செல் சுவரின் முழுமையான கறை பதிவு செய்யப்பட்டது. 10x இல், செல் சுவர் மற்றும் கருக்களின் முழுமையான கறை படிதல் 2x இல் சாய செறிவுகளைப் போலவே சாயங்களின் குறிப்பிடத்தக்க செறிவூட்டல் இல்லாமல் காணப்பட்டது. 100x இல் உள்ள சாய செறிவு, செல் சுவர் மற்றும் கருக்களில் உள்ள சாயங்களின் அதிகப்படியான செறிவூட்டலை உருவாக்கி, அவை கலந்து பாக்டீரியா செல்கள் மற்றும் புரோட்டோபிளாஸ்ட்களை அடையாளம் காணும் திறனைத் தடுக்கின்றன. செல் சுவர் மற்றும் அணுக்கருவை முழுமையாக கறைபடுத்துவதற்கு 2x மிகவும் உகந்ததாக இருந்தது. சாயத்தின் செறிவு அதிகரித்ததால் பின்னணி ஒளிரும் இரைச்சல் காணப்பட்டது. Lactobacillus acidophilus இல் , செல் சுவர் செரிமானத்திற்கு 175 μg/ml என்ற லைசோசைம் செறிவு போதுமானதாக இருந்தது. சாய செறிவூட்டலின் செயல்திறன் குறைந்த அளவு பின்னணி இரைச்சலுடன் 2x இல் சிறப்பாக இருந்தது.